Главная » 2014 » Июнь » 28 » Скачать Выделение и культивирование вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней для изготовления диагностических и вакцинных бесплатно
03:23
Скачать Выделение и культивирование вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней для изготовления диагностических и вакцинных бесплатно
Выделение и культивирование вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней для изготовления диагностических и вакцинных препаратов
Диссертация
Автор: Гаврилова, Вера Львовна
Название: Выделение и культивирование вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней для изготовления диагностических и вакцинных препаратов
Справка: Гаврилова, Вера Львовна. Выделение и культивирование вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней для изготовления диагностических и вакцинных препаратов : диссертация кандидата биологических наук : 03.00.06 / Гаврилова Вера Львовна; [Место защиты: Федер. центр охраны здоровья животных] Владимир, 2007 168 c. : 61 07-3/1503
Объем: 168 стр.
Информация: Владимир, 2007
Содержание:
1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
111 Общие сведения об аденовирусной инфекции кур
112 Характеристика вируса ССЯ-
113 Особенности эпизоотологии ССЯ-
114 Патогенез заболевания
115 Клинические признаки и патологоморфологические изменения
116 Антигенная активность и антигенное взаимоотношение штаммов вируса ССЯ-
117 Культивирование вируса ССЯ-
118 Диагностика болезни
119 Иммунитет и специфическая профилактика ССЯ-
1110 Основные принципы конструирования вакцин против ССЯ-
12 Адъюванты и их использование в составе вакцин
121 Минеральные адъюванты
122 Масляные адъюванты
123 Механизм действия адъювантов
13 Принципы контроля иммуногенности противовирусных препаратов
14 Заключение по обзору литературы
2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
21 Материалы и методы
211 Характеристика используемых материалов
212 Характеристика применяемых методов
22 Результаты исследований
221 Разработка метода обнаружения специфического ГАантигена в эмульсионных моновалентных вакцинах против ССЛ-
222 Разработка метода выявления ГА-антигена вируса ССЯ-76 в инактивированных поливалентных эмульсионных вакцинах
223 Отработка методики определения количества гемагглютинина в сорбированных вакцинах против ССЯ-
224 Влияние количества ГА-антигена в составе инактивированных вакцин на их антигеную активность
225 Оценка эффективности эмульсионных инактивированных вакцин против ССЯ-76 по количеству действующего начала в прививной дозе
2251 Определение протективного уровня поствакцинальных антител, обеспечивающих защиту цыплят от заражения вирусом ССЯ-
2252 Гистологические изменения в репродуктивных органах птиц привитых препаратами с различным содержанием ГА-антигена вируса ССЯ-
226 Зависимость антигенной активности сорбированных вакцин от содержания ГА-антигена вируса ССЯ-
227 Сравнительная оценка методов контроля биофабричных серий вакцин против ССЯ-76 по количеству ГА-антигена и антительному ответу
228 Адаптация вируса ССЯ-76 к культуре клеток эмбрионов птиц
3 ОБСУЖДЕНИЕ
4 ВЫВОДЫ
5 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
Введение:
Актуальность темы: Синдром снижения яйценоскости заболевание птиц, вызываемое выделенным в 1976 году ДНК-содержащим вирусом, который относится к семейству АёепоУ1г1дае, и наносит значительный экономический ущерб птицехозяйству за счет снижения продуктивности кур и ухудшения качества яиц, уменьшения выводимости цыплят и низкой их жизнеспособности (5,7,19Д0,69,77,93,114,116,145,158,160,161,162,179,190,199).Для профилактики ССЯ-76 разработаны и внедрены в практику птицеводства моновалентные и ассоциированные формы вакцин на основе минеральных и масляных адъювантов, массовое производство которых начато в нашей стране с 1993 года. В настоящее время эффективность вакцин против ССЯ-76 контролируют путем определения их антигенной активности в опытах на экспериментально привитых цыплятах по принципу сероконверсии.Существующий метод контроля не может быть полностью объективным, так как результаты во многом зависят от иммунного статуса и физиологического состояния вакцинированных птиц, условий их кормления и содержания, стрессовых воздействий, которые вполне вероятны в течение длительного времени проведения опытов.В научных разработках предприятий-изготовителей вакцин нет убедительной аргументации установленного протективного уровня поствакцинальных антител, который в большинстве случаев определен эмпирически и находится на уровне 5,0 1о§2.В настоящее время для ряда живых вакцин разработаны методы лабораторного контроля их эффективности, без постановки традиционной биопробы. В основу этих методов заложено определение титра вируса в препарате, коррелирующего с иммуногенностью, что обеспечивает получение максимально точных результатов, достоверно отражающих потребительские свойства вакцины (47,50,54). Применительно к инактивированным препаратам известны только единичные примеры оценки их иммуногенности по количеству протективного антигена в прививной дозе (40).Поэтому разработка нового метода контроля инактивированных вакцин против ССЯ-76 в дополнение к существующему способу и х оценки, с использованием подопытных птиц, представлялась весьма актуальной и послужила темой настоящей диссертационной работы.Помимо несоверщенства биологического контроля вакцины против ССЯ-76 имеется ряд технологических недоработок, особенно в части определения системы культивирования возбудителя. Учитывая «утиное» происхождение вируса, большинство предприятий, выпускающих средства специфической профилактики данной болезни вполне обоснованно используют для этих целей утиные эмбрионы, мотивируя выбранную модель возможностью максимального накопления возбудителя с полным сохранением его исходных антигенных и иммуногенных характеристик (55,57,58,74,162).Вместе с тем, описаны положительные результаты опытов по адаптации вируса ССЯ-76 к культурам клеток различного происхождения (102,103,165,207), что явилось предпосылкой для проведения исследований технологического аспекта данной работы.Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы являлось усовершенствование способа контроля иммуногенности масляноадъювантных и сорбированных вакцин против синдрома снижения яйценоскости-76, а так же определение возможности адаптации вируса ССЯ-76 к культуре клеток и изучение его антигенных свойств.Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи: 1. Отработать методику количественного определения гемагглютинина вируса ССЯ-76 в масляно-адъювантных и сорбированных вакцинах против данного заболевания; 2. Определить оптимальное количество гемагглютинирующего антигена вируса ССЯ-76, необходимое для формирования напряженного поствакцинального иммунитета; 3. Определить протективный уровень гуморальных антител, обеспечивающих устойчивость привитых птиц к возбудителю ССЯ-76; 4. Провести адаптацию вируса ССЯ-76 к культуре клеток эмбрионов птиц; 5. Изучить антигенные свойства культурального вируса ССЯ-76; 6. Внести изменения и дополнения в нормативную документацию на вакцины против ССЯ-76.Научная новизна. Впервые разработан способ выявления гемагглютинирующего антигена (ГА-антигена) вируса ССЯ-76 в сложных масляно-адъювантных системах. Способ является изобретением и в настоящее время проходит процедуру экспертизы в Федеральном институте промышленной собственности Роспатента.Установлено оптимальное количество ГА-антигена вируса ССЯ-76 в эмульсионных и сорбированных вакцинах, необходимое для формирования у привитых птиц напряженного иммунитета, и определены параметры гуморального ответа, характеризующие невосприимчивость привитой птицы к возбудителю ССЯ-76; Проведена адаптация вируса ССЯ-76 к культуре фибробластов эмбрионов уток (ФЭУ) и изучены антигенные свойства культурального варианта данного возбудителя.Практическая значимость. Предложен новый метод лабораторного контроля иммуногенности эмульсионных и сорбированных вакцин против ССЯ-76 по количеству ГА-антигена в готовых препаратах; В двух серологических реакциях (РТГА и ИФА) установлен протективный уровень антител, позволяющий объективно оценивать эффективность поствакцинального иммунитета против ССЯ-76 в лабораторных и производственных условиях; Для усовершенствования технологии изготовления вакцин против ССЯ-76 адаптирован к культуре клеток фибробластов эмбрионов уток штамм вируса ССЯ-76 «В 8/78».Положения, выносимые на защиту.Методики и результаты разработки способа количественного определения ГА-антигена в инактивированных вакцинах против ССЯ-76; Результаты изучения антигенной и иммуногенной активности инактивированных вакцин против ССЯ-76, в зависимости от содержания в них ГА-антигена; Результаты опытов по адаптации эмбрионального штамма «В8/78» вируса ССЯ-76 к культуре клеток печени эмбрионов кур и фибробластов эмбрионов уток и возможность применения его в технологии получения культуральной вакцины.Апробация работы. Материалы исследований доложены и обсуждены на научных семинарах лаборатории препаратов, применяемых в птицеводстве ВГНКИ (1999-2002 г ) , заседаниях научно-методической комиссии по вирусным инфекциям ФГУ ВГНКИ (1999-2001 г.), на межлабораторном совеш;ании ФГУ ВГНКИ (2002 г.); на конференции «Достижения молодых ученых - в ветеринарную практику», ВНИИЗЖ, г. Владимир 2000 г.; на конференции, посвященной 70-летию Ф Г У ВГНКИ, г. Москва 2001г.Публикации научных исследований. Основные положения диссертации опубликованы в четырех научных работах, и изложены в заключительном отчете Ф Г У ВГЬЖИ за 1999-2001 г.г. (№ Гос. Регистрации 02 200.1 06776); получено уведомление о положительном результате экспертизы изобретения «Способ определения иммуногенной активности антигена вируса ССЯ-76 в эмульсионной инактивированной вакцине».Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 142 листах машинописного текста и содержит: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты собственных исследований и их обсуждение, выводы, практические предложения, список литературы и приложения. Работа иллюстрирована таблицами (19), рисунками (4) и фотографиями (6). Список используемой литературы включает 207 источников, из них 84 работ отечественных и 123 зарубежных авторов.Выражаем искреннюю признательность всем сотрудникам лаборатории препаратов, применяемых в птицеводстве за консультативную и практическую помопдь в выполнении отдельных этапов работы. Выражаем благодарность директору МГП «ВИРИОН» к.б.н. Рождественскому И.К. и к.в.н. Хохлачева О.Ф., сотруднику ВНИИЗЖ к.б.н. Борисову В.В., и зав. лабораторией ЗАО по птицеводству «Братцевское» д.б.н. |Осидзе НТ| . за практическую, методологическую и организационную помощь в проведении экспериментов.
