Полуморфизм ДНК-локусов генов-кандидатов алкогольной болезни печени
Диссертация
Автор: Шангареева, Зилия Асгатовна
Название: Полуморфизм ДНК-локусов генов-кандидатов алкогольной болезни печени
Справка: Шангареева, Зилия Асгатовна. Полуморфизм ДНК-локусов генов-кандидатов алкогольной болезни печени Москва, 2005 0 c. :
Объем: 0 стр.
Информация: Москва, 2005
Содержание:
Введение
ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
11 Патогенез алкогольной болезни печени
111 Роль этанола в патогенезе алкогольной болезни печени
112 Метаболизм этанола в печени
113 Эффекты воздействия этанола на гепатоциты
12 Полиморфизм генов, участвующих в патогенезе алкогольной болезни печени
121 Полиморфизм ферментов, метаболизирующих этанол
122 Полиморфизм генов детоксикации ксенобиотиков
123 Полиморфизм генов провоспалительных цитокинов
ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
21 Объект исследования
22 Методы исследования
23 Статистическая обработка полученных результатов
Результаты исследования и обсуждение
ГЛАВА 3 КЛИНИКО-БИОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА
БОЛЬНЫХ АЛКОГОЛЬНОЙ БОЛЕЗНЬЮ ПЕЧЕНИ
31 Клиническая характеристика больных алкогольной болезнью печени
32 Биохимические показатели у больных алкогольной болезнью печени
ГЛАВА 4 ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ АЛКОГОЛЬДЕГИДРОГЕНАЗЫ
ADH2) И АЛЬДЕГИДДЕГИДРОГЕНАЗЫ (ALDH2)
41 Анализ рестрикционного полиморфизма Arg47His гена алкогольдегидрогеназы (ADH2)
42 Анализ рестрикционного полиморфизма Glu487Lys гена альдегиддегидрогеназы (ALDH2')
ГЛАВА 5 ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ ДЕТОКСИКАЦИИ КСЕНОБИОТИКОВ
51 Анализ рестрикционного полиморфизма (-1019)С/Т гена цитохрома Р-450 2Е1 (CYP2E1)
52 Анализ рестрикционного полиморфизма Ile462Val гена цитохрома Р-450 1А1 (CYP1A1)
53 Анализ рестрикционных полиморфизмов Tyrl 13His 3 экзона и
Hisl39Arg 4 экзона гена эпоксидгидролазы (тЕРНХ)
54 Анализ полиморфизмов генов глутатионтрансфераз (GSTM1, GSTT и GSTP1)
55 Анализ рестрикционного полиморфизма +3435С/Т гена множественной лекарственной резистентности (MDR1)
ГЛАВА 6 ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ ПРОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ
ЦИТОКИНОВ
61 Анализ рестрикционного полиморфизма (-308)G/A гена фактора некроза опухолей -а (TNF)
61 Анализ рестрикционного полиморфизма +252A/G гена лимфотоксина -a (LTA)
63 Анализ рестрикционного полиморфизма +3953С/Т гена интерлейкина-1 (IL-1B)
ГЛАВА 7 АНАЛИЗ АССОЦИАЦИИ КОМБИНАЦИЙ ГЕНОТИПОВ ГЕНОВ-КАНДИДАТОВ АЛКОГОЛЬНОЙ БОЛЕЗНИ ПЕЧЕНИ С
РИСКОМ РАЗВИТИЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ
Введение:
Актуальность проблемы. Согласно данным многочисленных эпидемиологических исследований в России последние десятилетия характеризуются значительным ухудшением наркологической ситуации, обусловленной ростом распространенности употребления наркотиков и стабильно высоким уровнем потребления алкоголя [Буркин М.М., Горанская С.В., 2002; Шабанов П.Д., 2002; Кошкина Е.А., 2001, 2002, 2004].
Распространение алкоголизма представляет серьезную медико-социальную проблему. Способствуя развитию соматических и психических заболеваний, злоупотребление алкоголем остается одной из ведущих причин заболеваемости и смертности населения. Систематическое употребление алкоголя, в отличие от большинства других психоактивных веществ, с высокой долей вероятности приводит к развитию патологических процессов практически во всех органах и тканях [Бочков Н.П. и др., 1988; Лопаткина Т.Н., 1995; Пауков B.C., 1996; Фридман Л.С. и др., 1998; Иванец Н.Н., 2001; Шабанов П.Д., 2002; Высокогорский В.Е. и др., 2003; Bloor J.H. et al„ 1994; Lieber Ch.S., 1994; Becker U. et al„ 1996; Bellantani S. et al., 1994, 1997]. Важнейшим последствием патологического действия алкогольной интоксикации является алкогольное поражение печени. Существует прямая корреляция между количеством и длительностью потребляемого алкоголя и уровнем смертности от заболеваний печени. Так, по данным А.В. Немцова в 2001 году среди всех причин смертности, связанных с употреблением алкоголя смертность от алкогольной болезни печени 7,8% (4,7 на 100 тыс. населения). Для сравнения смертность от алкогольных психозов составила 1,2% (0,7 на 100 тыс. населения) [Немцов В.А., 2003]. Причина наибольшей подверженности печени токсическому действию алкоголя, вероятно, заключается в том, что именно этот орган, выполняющий барьерную функцию, играет ключевую роль в процессах обезвреживания этанола.
Современная концепция этиопатогенеза алкогольного поражения печени включает в себя общие положения о многофакторности и полигенности этой патологии, а также о сложном характере влияния как генетических, так и внешнесредовых факторов в процессе развития заболевания. В связи с тем, что в развитии алкогольной болезни печени (АБП) значительную роль играют наследственные факторы, в настоящее время во всем мире широко проводятся исследования генетических маркеров заболевания [Фридман JI.C. и др., 1998; Зейтц Г., 2001; Спицын В.А. и др., 2001; Hrubec Z., Omenn G.S. 1984; Bloor J.H. et al., 1994; Lieber Ch.S., 1994; Becker U. et al., 1996; Reed T. et al., 1996].
Важно отметить, что не у всех лиц, длительно злоупотребляющих спиртными напитками, развивается поражение печени. Частота выявления цирроза на вскрытии в данной группе не превышает 10-15%, а у 30% изменения печени вообще отсутствуют [Подымова С.Д., 1998; Фридман J1.C. и др., 1998; Зейтц Г., 2001; Маевская М.В., 2001; Шабанов П.Д., 2002; Шерлок Ш., Дули Дж. 2002; Bloor J.H. et al., 1994; Lieber Ch.S., 1994; Sherlock S., 1995; Bellantani S. et al., 1997]. Переносимость алкоголя и риск ущерба здоровью весьма индивидуальны и в значительной мере зависят от генетически детерминированной степени активности ферментов метаболизма этанола [Мансуров Х.Х., Мироджов Г.К., 1983; Подымова С.Д., 1998; Фридман Л.С. и др., 1998; Серов В.В., 1999; Маевская М.В., 2001; Шабанов П.Д., 2002; Шерлок Ш., Дули Дж., 2002; Day С.Р. et al., 1993; Carr L.G. et al., 1995; Whitfield J.B., 1997; Bassendine M.F., Day C.P., 1998; Grove J. et al, 1998]. Предполагается, что с изучением ассоциативной роли генетических и средовых факторов в патогенезе АБП будет связан дальнейший успех в раскрытии природы заболевания, а также в разработке эффективных методов профилактики с учетом генетической конституции и особенностей образа жизни конкретного индивида.
Исходя из современных представлений о патофизиологических механизмах алкогольного повреждения печени, связанных с особенностями метаболизма этанола в организме, можно выделить группы генов-кандидатов, изменения структуры и функции которых могут вносить вклад в развитие АБП. Поскольку ключевым моментом патогенеза АБП является повреждающий эффект ацетальдегида, гены ферментов метаболизма этанола и ацетальдегида рассматриваются в качестве основных кандидатных генов заболевания. Немаловажную значимость в качестве генов предрасположенности к АБП представляют гены детоксикации ксенобиотиков, поскольку процессы обезвреживания ксенобиотиков и этанола в печени тесно сопряжены [Подымова С.Д., 1998; Серов В.В., 1999; Шабанов П.Д., 2002; Lieber Ch.S., 1994; Шерлок III., Дули Дж. 2002; Day С.Р. et al., 1993; Carr L.G. et al., 1995; Abittan Ch. et al., 1999]. Кроме того, в последнее время все чаще изучается функциональный статус иммунной системы в качестве медиатора алкогольного повреждения печени [Буеверов А.О., 1998; Подымова С.Д., 1998; Зейтц Г., 2001; Ивашкин В.Т., 1998, 2002; Mcclain C.J., Cohen D.A., 1989; Hirsch S., et al., 1997; Maher J.J., 1999; Mcclain C.J. et al., 1999; Szuster-Ciesielska A. et al., 2000].
Число работ, посвященных анализу ассоциаций полиморфных ДНК-локусов с риском развития АБП невелико, а в Республике Башкортостан подобные исследования не проводились. Учитывая, что разработка эффективных мероприятий по ранней диагностике, профилактике и терапии АБП связаны с изучением молекулярно-генетических основ заболевания, работы, направленные на выявление генетических маркеров алкогольного поражения печени, являются особенно актуальными.
Цель исследования.
Оценка роли полиморфных вариантов генов, задействованных в патогенезе алкогольной болезни печени, в формировании наследственной предрасположенности к развитию заболевания и тяжести течения патологического процесса.
Задачи исследования:
1. Провести анализ клинико-биохимических показателей больных алкогольной болезнью печени.
2. Изучить полиморфизм генов, кодирующих ферменты метаболизма этанола (алкогольдегидрогеназы (ADH2) и альдегиддегидрогеназы (ALDH2)) у больных алкогольной болезнью печени.
3. Изучить полиморфизм генов, кодирующих ферменты детоксикации ксенобиотиков (CYP2E1, CYP1A1, 3 и 4 экзонов тЕРНХ, GSTM1, GSTT1, GSTP1 и MDR1) у больных алкогольной болезнью печени.
4. Изучить полиморфизм генов, кодирующих провоспалительные цитокины (TNF, LTA и IL-1B) у больных алкогольной болезнью печени.
5. Провести анализ ассоциации комбинаций генотипов полиморфных ДНК-локусов генов-кандидатов алкогольной болезни печени с риском развития и тяжестью течения заболевания.
Научная новизна исследования.
Впервые при комплексном анализе генетического полиморфизма ферментов метаболизма этанола, детоксикации ксенобиотиков и провоспалительных цитокинов у мужчин больных АБП и здоровых индивидов контрольной группы определены генетические маркеры предрасположенности к заболеванию, обусловленные полиморфными вариантами генов альдегиддегидрогеназы (ALDH2), цитохрома Р-4502Е1 оCYP2E1), цитохрома Р-4501А1 (CYP1A1) и интерлейкина-ф (IL-1B).
Впервые обнаружена ассоциация полиморфизмов гена цитохрома Р-4502Е1 (CYP2E1) и гена фактора некроза опухолей -a (TNF) со степенью тяжести алкогольного поражения печени.
Впервые выявлены комбинации генотипов, ассоциированные с риском развития и тяжестью течения АБП.
Научно-практическая значимость работы.
Полученные данные позволяют раскрыть молекулярно-генетические механизмы развития АБП, что является основанием для создания эффективных и экономичных диагностических протоколов заболевания (наркологические и терапевтические отделения) при разработке основ профилактической медицины.
Материалы работы могут быть использованы в учебном процессе на медицинских, биологических факультетах Государственных образовательных учреждений высшего профессионального образования, а также на курсах Института последипломного образования врачей общей практики.
Положения, выносимые на защиту.
1. Различия в биохимических показателях между больными гепатитом и стеатозом обусловлены цитолитическим синдромом и гипергаммаглобулинемией.
2. При изучении полиморфизма гена альдегиддегидрогеназы (ALDH2') у больных АБП выявлено, что генотип ALDH2*1/1 определяет предрасположенность к развитию алкогольной болезни печени.
3. Молекулярно-генетический анализ полиморфизма генов цитохрома Р-450 (CYP2E1 и CYP1A1) показал, что риск развития алкогольной болезни печени ассоциирован с генотипами С1С2 гена CYP2E1 и Ile/Val гена CYP1A1, а степень тяжести алкогольного поражения печени - с генотипом С1С2 гена CYP2E1.
4. Генотип GA гена фактора некроза опухолей -а (TNF) является маркером тяжелого поражения печени, а генотип Е1Е2 гена интерлейкина-1 (IL-1B) -маркером предрасположенности к алкогольной болезни печени.
5 Анализ сочетаний генотипов полиморфных локусов позволяет выявить комбинации генотипов, ассоциированные с риском развития и тяжестью течения алкогольной болезни печени
Апробация работы.
Материалы диссертационной работы были представлены на Пироговской студенческой научной конференции (Москва, 2003), European human genetics conference (Birmingham, England, 2003), IV International Medical Conference for Students and Young Scientists "MEDICINE - HEALTH XXI century" (Dnepropetrovsk, Ukraine, 2003), Conference for young scientists and students on molecular biology and genetics (Kyiv, Ukraine, 2003), Всероссийской научно-практической конференции "Современные достижения клинической генетики" (Москва, 2003), Межрегиональной конференции биохимиков Сибири, Урала и Поволжья "Биохимия от исследования молекулярных механизмов до внедрения их результатов в клиническую практику и производство" (Оренбург, 2003), Всероссийской научной конференции молодых ученых "Актуальные вопросы инфекционной патологии человека, клинической и прикладной иммунологии" (Уфа, 2004), Human Genome Meeting (Berlin, Germany, 2004), 67-й, 68-й, 69-й Республиканской итоювой научно-практической конференции студентов и молодых ученых Республики Башкортостан с международным участием "Вопросы теоретической и практической медицины" (Уфа, 2000 - 2004), межлабораторных семинарах и заседаниях Ученого Совета Института биохимии и генетики Уфимского научного центра РАН (Уфа, 2003, 2004)
Публикации.
По теме диссертации опубликовано 17 печатных работ
Связь работы с научными программами.
За время выполнения работы получен грант фонда ФЦП "Интеграция" по программному мероприятию 1.2. "Использование потенциала ведущих научных центров страны для стажировки молодых исследователей, аспирантов и докторантов высших учебных заведений" (№ контракта 33006/2616 от 4.11.2003 г.).
Работа выполнена при частичной финансовой поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (грант № 02-04- 97905 "Агидель") и программы фундаментальных исследований Президиума РАН "Фундаментальные науки - медицине".
