Главная » 2014 » Сентябрь » 27 » Скачать Направленный биосинтез ксиланазы микроскопическим грибом Trichoderma viride 44-11-62/3 и разработка технологии получения бесплатно
07:50
Скачать Направленный биосинтез ксиланазы микроскопическим грибом Trichoderma viride 44-11-62/3 и разработка технологии получения бесплатно
Направленный биосинтез ксиланазы микроскопическим грибом Trichoderma viride 44-11-62/3 и разработка технологии получения ферментного препарата
Диссертация
Автор: Ларина, Любовь Николаевна
Название: Направленный биосинтез ксиланазы микроскопическим грибом Trichoderma viride 44-11-62/3 и разработка технологии получения ферментного препарата
Справка: Ларина, Любовь Николаевна. Направленный биосинтез ксиланазы микроскопическим грибом Trichoderma viride 44-11-62/3 и разработка технологии получения ферментного препарата : диссертация кандидата технических наук : 03.00.23 Москва, 2006 222 c. : 61 06-5/1576
Объем: 222 стр.
Информация: Москва, 2006
Содержание:
1 Введение
2 Обзор литературы
21 Общее представление об алкалоидах
Распространение и применение
22 Алкалоиды, биогенетически происходящие из триптофана
221 Эргоалкалоиды
222 Модифицированные циклические пептиды, содержащие остаток триптофана 11 2221 Рокефортин Структура и биосинтез, биологическая активность, продуценты
223 Регуляция и условия биосинтеза индольных алкалоидов
23 Роль алкалоидов в метаболизме и физиологии продуцентов
3 Материалы и методы
4 Результаты 45 41 Выбор объекта исследований Мутагенез и отбор штамма-продуцента 4642 Физиолого-биохимические особенности мутантного штамма
Proquefortii f39 Алкалоидный состав Proquefortii
43 Оптимизация химического состава ферментационной среды
44 Оптимизация физико-химических условий выращивания продуцента
45 Условия выращивания посевного материала Proquefortii f39
46 Условия, определяющие форму роста Proquefortii f39
47 Выделение рокефортина из культуральной среды 84 Заключение 93 Выводы 94 Список литературы 95 Приложение
Введение:
Актуальность проблемы
В последние годы наблюдается возросший интерес специалистов к биологически активным веществам микроскопических грибов. Особое внимание в связи с действием на организм человека и животных привлекают микотоксины. К последним относятся многие грибные алкалоиды — продукты вторичного обмена, происходящие из аминокислот. Интерес к алкалоидам обусловлен не только их токсикологическим значением. Широкое и разнообразное применение алкалоиды находят при решении как фундаментальных задач таксономии, биохимии, так и прикладных задач химиотерапии и экологии.
Одним из наиболее значимых вторичных метаболитов микромицетов является рокефортин, относящийся к группе дикетопиперазиновых алкалоидов. Этот метаболит, синтезируемый многими видами грибов рода Penicillium, обладает ярко выраженными нейротоксическими, антибиотическими и антипротозойными свойствами (Scott, 1981; Martin Gonzalez et al, 1997). Продуценты рокефортина широко распространены в природе и часто поражают продукты питания и корма. Как следствие, проблемы биосинтеза и свойств этого микотоксина привлекают внимание многих специалистов-токсикологов. Кроме того, значительный интерес к рокефортину проявляется и в фундаментальной науке. Рокефортин используется как хемотаксономический маркер при определении некоторых видов грибов рода Penicillium.
Препараты рокефортина находят применение при токсикологическом мониторинге, в первую очередь, кормов, при изучении механизмов микотоксикозов и в хемотаксономии. В связи с этим, особую значимость приобретают задачи, связанные с препаративным получением рокефортина. Ранние исследования касались лишь некоторых проблем его образования и имели сугубо фундаментальную направленность. К настоящему времени известны биогенетические предшественники рокефортина, но последовательность его синтеза носит лишь предположительный характер. Интенсивно изучались условия биосинтеза грибами этого токсина. Установлена зависимость уровня накопления рокефортина от различных факторов внешней среды (Решетилова, Козловский, 1985; Kusch, Rehm, 1986; Kulakovskaya et al., 1997). Однако концентрация алкалоида в лабораторных условиях, как правило, невысока (5-15 мг/л) (Козловский, Решетилова, 1984). Имеется обширный материал по распространению способности к синтезу рокефортина среди микроскопических грибов (Frisvad, Filtenborg, 1983;
Козловский, Решетилова, 1987; Frisvad, Filtenborg, 1989). Вместе с тем, малоизученны прикладные аспекты микробиологического получения алкалоида. Например, не исследованы условия его препаративного выделения, существующие же методы основаны на обобщенном подходе к извлечению метаболитов подобного рода.
Таким образом, имеющиеся данные несистематичны и не могут являться основой технологии ферментации грибов-продуцентов рокефортина.
Цель и задачи работы.
Целью работы являлось создание метода микробиологического получения рокефортина. Для достижения этой цели необходимо было решить следующие задачи:
• провести отбор перспективного штамма среди грибов рода Penicillium и на его основе получить высокопродуктивную культуру методом мутагенеза и селекции;
• исследовать некоторые физиолого-биохимические свойства полученного мутантного штамма;
• определить наиболее благоприятные для биосинтеза рокефортина состав среды и условия выращивания продуцента;
• оптимизировать условия выделения целевого продукта;
• создать лабораторный регламент на микробиологическое получение препарата рокефортина.
Научная новизна работы заключается в том, что:
• установлена возможность получения стабильных мутантов Penicillium roquefortii с измененным уровнем алкалоидообразования;
• установлена причина циклического характера биосинтеза рокефортина. Предложен способ устранения колебаний концентрации внеклеточного алкалоида.
• у гриба P.roquefortii ?39 выделены и охарактеризованы новые изомеры клавиновых эргоалкалоидов, образующиеся в минорных количествах.
Практическая ценность результатов исследования заключается в:
• получении мутанта с повышенным уровнем накопления рокефортина;
• оптимизации условий культивирования продуцента и выделения целевого продукта;
• создании на основе полученных данных лабораторного регламента на микробиологическое производство препарата рокефортина.
