Главная » 2014 » Июль » 15 » Скачать Экспериментальное исследование нейропротекторных свойств афобазола. Мелкумян, Диана Степановна бесплатно
01:14
Скачать Экспериментальное исследование нейропротекторных свойств афобазола. Мелкумян, Диана Степановна бесплатно
Экспериментальное исследование нейропротекторных свойств афобазола
Диссертация
Автор: Мелкумян, Диана Степановна
Название: Экспериментальное исследование нейропротекторных свойств афобазола
Справка: Мелкумян, Диана Степановна. Экспериментальное исследование нейропротекторных свойств афобазола : диссертация кандидата биологических наук : 14.00.25 Москва, 2006 134 c. : 61 06-3/701
Объем: 134 стр.
Информация: Москва, 2006
Содержание:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ВВЕДЕНИЕ
Глава
I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
11 Механизмы гибели нейронов при ишемическом инсульте
111 Современные представления о биохимических изменениях при локальной ишемии
112 Механизм апоптотической гибели нейронов при ишемии
113 Взаимосвязь стресса, развития депрессий и нейродегенеративных заболеваний
12 Мозговой нейротрофический фактор BDNF
121 Характеристика нейротрофинов
122 BDNF член семейства нейротрофинов
123 Строение и регуляция гена BDNF
124 Рецепторы нейротрофинов
125 Экспрессия BDNF в нервной системе
126 Взаимовлияние различных факторов и экспрессии BDNF
1261 Связь с нейромедиаторами
1262 Связь с гормонами
127 Влияние стресса на экспрессию BDNF в различных структурах мозга
128 Фармакологические подходы к регуляции уровня BDNF
13 Афобазол новый селективный анксиолитик
Глава
II МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
21 Определение уровня BDNF методом иммуноферментного анализа
22 Тест «Открытое поле»
23 Моделирование окислительного стресса и глутаматной токсичности in vitro
31 Модель глутаматной токсичности
232 Модель окислительного стресса
24 Методы оценки жизнеспособности нейронов в культуре
241 МТТ-тест
242 Окраска флюоресцентным ядерным красителем Хёхст
25 Иммунофлюоресцентный метод определения активной каспазы-
26 Статистическая обработка результатов
Глава
III НЕЙРОПРОТЕКТОРНЫЕ ЭКСПЕРИМЕНТАХ IN VITRO СВОЙСТВА АФОБАЗОЛА В
31 Исследование нейропротекторного действия афобазола на модели окислительного стресса
32 Исследование нейропротекторного действия афобазола на модели глутаматной токсичности
33 Исследования влияния афобазола на активную каспазу-
34 Изучение влияния афобазола на уровень BDNF в культуре клеток НТ-
Глава
IV ОЦЕНКА ВЛИЯНИЯ АФОБАЗОЛА НА УРОВЕНЬ BDNF В РАЗЛИЧНЫХ СТРУКТУРАХ МОЗГА В ЭКСНЕРИМЕНТАХ IN VIVO
41 Исследование содержания BDNF в структурах головного мозга мышей C57BL/6 и BALB/c в различное время года
42 Изменения уровня BDNF в структурах головного мозга мышей C57BL/6 и BALB/c при стрессовых воздействиях
43 Влияние афобазола на содержание BDNF в структурах головного мозга мышей C57BL/6 и BALB/c в условиях эмоционального стресса
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ СНИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
Введение:
Актуальность темы Эпидемиологические данные свидетельствуют, что по распространенности инсульт занимает третье место после болезней сердца и нововобразований, являясь ведущей причиной смертности. В России ежегодно регистрируется свыше 400 тыс, случаев инсульта (Дамулин И.В. и соавт., 2003; Захаров В.В. и соавт., 2004). В последние годы достигнут значительный прогресс в изучении патогенетических механизмов сосудистых головного мозга имеет следствием заболеваний мозга. Ишемия последовательное развитие патобиохимических реакций глутамат-кальциевого каскада, сопровождаемых активацией свободно-радикальных процессов. Гиперпродукция активных форм кислорода на фоне дефицита антиоксидантной защиты приводит к развитию «окислительного стресса». Избыточное накопление Са вызывает активацию внутриклеточных ферментов фосфолипаз, протеинкиназ и эндонуклеаз, за которым следует повреждение и гибель клеток (Berridge М., 1985; Hakim А. et al., 1989; Orrenius S. et al., 1992; Olney J., 1994; Гусев E. и соавт., 2001). Установлена роль апоптоза в формировании очагов поражения нервной ткани (Deshmukh М. et al., 1996). Определена роль нейротрофинов, в частности мозгового нейротрофического фактора BDNF, в защите нейронов от повреждений (de Luca А. et al., 1996). Анализ литературных данных показывает, что биохимические механизмы повреждения нервных клеток при ишемии сходны с вызванными стрессовыми воздействиями (Ecsh Т. et al., 2002). Стрессовые события рассматриваются в качестве этиопатогенетического фактора ишемических нарушений. С другой стороны, усиление анксиогенеза отмечается в симптомокомплексе постишемических расстройств и нейродегенеративных заболеваний. Патофизиологические исследования показывают, что при ишемических повреждениях включаются эндогенные механизмы нейропротекции (Knusel В. et al,, 1992; Sendtner M., 1999). Терапия инсультов также основана на применении нейропротекторных средств, в составе которых присутствуют транквилизаторы и антидепрессанты (Гусев Е. и соавт., 2001). Таким образом, разработка и изучение новых лекарственных средств, сочетающих анксиолитические и нейропротекторные свойства, является актуальной задачей современной фармакологии. В ГУ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова РАМН разработан и внедрен в медицинскую практику селективный анксиолитик афобазол (Seredenin S., 2003). Накоплены сведения о наличии у афобазола нейропротекторной активности. Так, установлено, что афобазол усиливает мозговой кровоток и повышает выживаемость крыс в условиях глобальной преходящей ишемии, вызванной перевязкой сонных артерий (Силкина И.В. и соавт., 2004), снижает выраженность патоморфологических изменений «пенумбры» в условиях локальной ишемии, вызванной перевязкой средней мозговой артерии (Баласанян нарушений М.Г., на 2003), снижает выраженность неврологических модели интрацеребральной посттравматической гематомы (Галаева И. и соавт., 2005). Нолученные данные подтверждают перспективность дальнейшего изучения механизмов реализации сочетанного анксиолитического и нейропротекторного эффекта афобазола, что будет способствовать расширению спектра его применения в клинической практике. Цель исследования Доказать наличие нейропротекторной активности афобазола в опытах in vitro и участие в механизме действия препарата мозгового нейротрофического фактора BDNF на экспериментальных моделях in vitro и in vivo.Задачи исследования 1. Изучить нейропротекторную активность афобазола на модели окислительного стресса в культуре нейронов. 2. Изучить нейропротекторную активность афобазола на модели глутаматной токсичности в культуре нейронов. 3. Исследовать влияние афобазола на активную каспазу 3 в культуре нейронов. 4. Изучить влияние афобазола на уровень BDNF в культуре нейронов. 5. Выявить изменения уровня BDNF в мозговых структурах инбредных мышей C57BL/6 и BALB/c при стрессовых воздействиях. 6. Фармакологически изучить влияние афобазола на динамику изменения содержания BDNF в структурах головного мозга мышей C57BL/6 и BALB/c, вызванных стрессовыми воздействиями. Научиая новизна В результате впервые проведенного исследования нейропротекторной активности нового селективного анксиолитка афобазола в культуре клеток показано, что афобазол в концентрациях, близких к зарегистрированным в плазме крови, после системного введения в терапевтических дозах, обладает заш,итным действием при повреждении гиппокампальных нейронов перекисью водорода и глутаминовой кислотой. Установлено, что в условиях глутаматной токсичности афобазол препятствует гиперактивации каспазы-3 в культуре клеток линии НТ-22. Впервые установлены межлинейные различия в содержании мозгового нейротрофического фактора BDNF в структурах головного мозга инбредных мышей с различным фенотипом эмоционально-стрессовой реакции. Показано, что у интактных животных уровень нейротрофина выше у мышей линии BALB/c. Стрессовое воздействие вызывает длительное снижение уровня BDNF у мышей BALB/c, в отличие от C57BL/6, у которых вслед за кратковременным снижением уровня нейротрофина, следует его восстановление до исходных значений. Впервые показана способность афобазола повышать уровень BDNF в культуре нейронов. Доказано, что афобазол в дозе 5 мг/кг при повторных введениях восстанавливает уровень мозгового нейротрофического фактора в коре, гипоталамусе и стриатуме мышей BALB/c, сниженный в результате стрессовых воздействий. Одновременно установлены межлинейные различия в эффектах стрессирующих воздействий и афобазола на уровень BDNF у мышей C57BL/6 и BALB/c, что подтверждает генетически детерминированные различия в механизмах формирования эмоционально-стрессовой реакции животных этих линий. Научно-практическая значимость Установленные регулировать защитные свойства афобазола и способность его содержание и BDNF раскрывают эффекта механизмы и нейропротекторного анксиоселективного обосновывают дальнейшие фармакологические исследования с использованием BDNF в качестве мишени. Специфика изменений BDNF, выявленная у животных с различной эмоционально-стрессовой реакцией, указывает на необходимость учета фенотипа ответа на стресс не только при терапии анксиолитиками, но и при проведении лечебных мероприятий, направленных на нейропротекцию. Результаты материалов выполненных исследований изучения необходимых являются афобазола для составляюш,ей в качестве в доклинического средства, нейропротекторного представления регистрационную систему Минздравсоцразвития РФ.
